野生茯苓鉴定及其木质纤维素降解酶系研究

摘要: 为揭示茯苓木质纤维素降解酶系及培养方式对其主要酶系的影响，该研究测定了茯苓主要木质纤维 素降解酶系。首先对野生茯苓菌株进行培养特性的显微观察；再利用3 对引物PCR 扩增进行系统发育学的 鉴定；经定性培养筛选出优势菌株YX1，最后采用酶标仪测定不同条件下纤维素酶、半纤维素酶和木质素 降解酶的活力大小。结果表明:（1）茯苓有菌丝体、子实体和菌核3 种形态特征。（2）PCR 分别获得rDNA-ITS 序列1 652 bp、核糖体大亚基序列660 bp 和翻译延伸因子序列545 bp，提交至NCBI，登录号分别为 ON129554、ON129553 和ON155840。（3）纤维素酶和半纤维素酶在有/无松木屑条件下，外切β-葡聚糖 酶(CBH)、内切β-葡聚糖酶(EG)和β-葡萄糖苷酶(BGL)最高分泌量分别为16 ~ 17、32 ~ 35、36 ~ 37 U•mL-1； 木聚糖酶、甘露聚糖酶和α-葡萄糖苷酶最高分泌量分别为28 ~ 38、280 ~ 342、9 ~ 11 U•mL-1；锰过氧化物 酶(MnP)、漆酶(Laccase)、木素过氧化物酶(LiP)这3 种木质素降解酶在4 种不同培养液中都有微弱的酶活 性。综上表明，该研究结合形态学与分子鉴定，明确了野生茯苓YX1 的分类地位，与褐腐菌在亲缘关系 上既有联系又存在遗传差距，测定结果显示木质纤维素酶中的酶活大小依次为甘露聚糖酶>木聚糖 酶>BGL>EG>CBH>α-葡萄糖苷酶>LiP>MnP>Laccase，纤维素酶和半纤维素酶酶活之间存在显著差异 (P<0.05)，本研究为茯苓产生木质纤维素降解酶系的降解机制提供了基础酶学参考。