巨大侧耳原生质体制备条件的优化

摘要: 为优化巨大侧耳原生质体的制备条件，该研究以两株不同温型的巨大侧耳菌株 PG46 和 PG79 为材料，采用单因素和正交试验方法，对原生质体制备的菌丝体菌龄、稳渗剂种类、 溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间进行研究。结果表明：（1）在单因素实验中，巨大侧耳 原生质体制备的适宜条件为菌龄 5 d，溶壁酶浓度 2.5%，0.6 mol·L-1 的甘露醇稳渗剂，32 ℃ （PG46）或 27~35 ℃（PG79）酶解 4 h。（2）正交试验验证并优化了单因素实验结果，组 合 2（菌龄 5 d，溶壁酶浓度 2.5%，0.6 mol·L-1 的甘露醇，32 ℃酶解 4 h）为 PG46 和 PG79 原生质体制备的最适条件，原生质体得率分别为 1.12×107 CFU·mL-1 和 7.28×106 CFU·mL-1。 （3）F-test 检验中，各因素对原生质体制备的影响程度依次为菌龄＞溶壁酶浓度＞酶解温 度＞酶解时间（PG46），菌龄＞酶解时间＞酶解温度＞溶壁酶浓度（PG79）。综上所述， 两株不同温型巨大侧耳菌株的原生质体制备条件基本一致，菌龄对两菌株原生质体得率的影 响程度最显著。该研究结果可为后续巨大侧耳的杂交育种、遗传转化、全基因组测序等工作 奠定基础，进一步推动巨大侧耳分子遗传学的发展。